M-26碱性木聚糖酶的分离纯化及酶学性质研究

从Bacillus pumilus M-26发酵液中分离纯化碱性木聚糖酶,进行酶学性质研究,同时制备工业用碱性木聚糖酶制剂。首先将M-26发酵液进行硫酸铵盐析,制备工业用碱性木聚糖酶干品;然后进行sephadexG-25层析脱盐和cellulose DE-52层析得以纯化。硫酸铵的饱和度50%,酶制剂的酶活可达9 000 IU/g,收率为85%;分离纯化使酶的比活为126.32 IU/mg蛋白,纯化倍数为19.89,酶的回收率12.83%;分子量约为20 ku;M-26碱性木聚糖酶的最适温度和pH分别是55℃和pH 8.0,具有一定的耐碱性;该酶无纤维素酶活性,Fe2＋对其有激活作用;Mn2＋、Zn2＋、Fe3＋、Cu2＋对其具有抑制作用。短小芽胞杆菌M-26碱性木聚糖酶具有纸浆生物漂白应用前景。     

颈项透明层厚度超声联合无创DNA对孕妇胎儿染色体非整倍体异常诊断效能的影响

摘要 目的：探讨颈项透明层(nuchal translucency,NT)厚度超声联合无创DNA对孕妇胎儿染色体非整倍体异常诊断效能的影响。方法：2018年7月到2020年4月选择在本院进行产前筛查的孕妇120例,所有孕妇都给予NT厚度超声联合无创DNA检查,采用羊水穿刺分析检测结果为阳性的胎儿情况。结果：120例胎儿的NT厚度为0.8~10 mm,平均厚度为1.57±0.41 mm;不同孕妇年龄的NT厚度对比差异无统计学意义(P>0.05)。以羊水穿刺检测结果为金标准,120例胎儿中检出染色体非整倍体异常7例,NT超声检出12例,无创DNA检出13例,联合检出14例。NT超声、无创DNA与联合诊断的染色体非整倍体异常敏感性为57.1%、85.7%和100.0%,特异性为92.9%、93.8%和93.8%。检测结果为阳性的14例胎儿中,还包括3例淋巴水囊瘤,2例单脐动脉伴胎儿宫内发育迟缓,1例胎儿双肾畸形,1例胎儿并腿畸形。结论：颈项透明层厚度超声联合无创DNA在孕妇胎儿染色体非整倍体异常中的诊断具有操作简便、无创伤等特点,诊断敏感性与特异性都比较高,可对临床医生遗传咨询有一定的参考价值。     

冬凌草内生细菌的分离鉴定及其对植物病害的生防作用

从冬凌草(Rabdosia rubescens (Hemsl.) H.Hara)中分离筛选出1株对多种作物真菌病害具有显著拮抗作用的细菌,命名为KD3.通过其形态特征和生理生化特性以及16S rRNA序列的同源性分析,鉴定该菌株为枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis).试验表明,KD3菌株能够显著抑制多种病原真菌的侵染,具有良好的应用开发潜力.     

不同生境重楼内生真菌及土壤真菌多样性比较

【背景】植物内生菌的群落组成随物种基因型及不同部位、生长地和环境条件不同而发生变化,而植物相关微生物会影响植物的生长、代谢、化学成分的积累与合成,并且可能对药用植物有效成分的合成造成影响。【目的】通过对不同生长环境重楼内生及土壤真菌群落多样性的研究,寻找园区环境与野生环境的差异真菌,为野生药用植物的人工栽培提供理论基础。【方法】测定两种环境中土壤的理化指标,并采用Illumina HiSeq高通量测序技术分别对野生环境及园区环境中重楼内生及土壤真菌群落转录间隔区ITS进行扩增子序列测定,对不同土壤环境真菌群落组成与多样性差异进行生物信息学分析。【结果】对重楼相关土壤及内生真菌的多样性分析结果显示,野生环境中的真菌丰度及多样性均高于园区环境。其中野生环境与园区环境中根际土壤真菌的丰度有显著性差异(P0.05)。真菌群落注释结果表明,两种环境中分别注释到8个门;在属水平上,野生环境注释到82个属,园区环境注释到78个属;不同土壤环境对微生物群落丰度有着较为显著的差异。野生环境中有4.04%特有的OTU,园区环境中有4.84%特有的OTU。通过LEfSe分析找到了园区环境与野生环境具有显著性差异的生物标记物,Ttracladium marohalianum、Thelephorales和Thelephoraceae为区别两种环境的生物标记物。【结论】野生环境较园区环境在土壤条件上更为疏松,并具有较高的含水量,矿质元素含量也更高,其真菌群落多样性及丰度较园区环境更为丰富。该研究结果将对重楼引种栽培后的质效变迁研究提供理论基础。     

核桃黑斑病拮抗放线菌WMF106发酵条件优化和抑菌物质稳定性

[背景]暗蓝色链霉菌WMF106对核桃黑斑病病原菌野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris pv.campestris)有较好的抑制作用,优化其发酵培养基与发酵条件将为核桃黑斑病生防菌剂的制备与应用提供参考.[目的]优化核桃黑斑病生防菌株WMF106的发酵条件,测定其抑菌物质稳定性,并通过田间防效测...     

猕猴桃细菌性溃疡病生防菌的筛选、鉴定及其防效初探

从健康猕猴桃植株中筛选具有生防潜力的内生放线菌,为猕猴桃细菌性溃疡病防治提供材料。采用平板渗透法筛选对猕猴桃细菌性溃疡病具有拮抗作用的内生放线菌,通过测定不同拮抗内生放线菌发酵液对猕猴桃溃疡病病原菌(Pseudomonas syringae pv.Actinidiae,Psa)的最低抑制浓度(Minimal Inhibitory Concentrations,MIC)筛选高抗性菌株;采用喷雾法及注干法进行高抗性菌株的田间防治试验;结合形态、生理生化特征及16S r DNA序列分析,明确高抗性菌株分类地位。从431株内生放线菌中筛选出7株具有明显抗性的菌株,其中菌株M109的抑菌效果最强(MIC值为0.91 mg/m L)。田间试验表明,菌株M109的喷雾法防效为72.1%,注干法防效为84.6%。分类鉴定结果显示菌株M109为肉桂地链霉菌(Streptomyces cinnamonensis)。试验表明,肉桂地链霉菌S.cinnamonensis M109对猕猴桃细菌性溃疡病防效显著,具有应用潜力。     

基于微卫星标记的中国枣食芽象甲地理种群遗传多样性分析

【目的】枣食芽象甲Scythropus yasumatsui是我国北方枣树Zizyphus jujuba上的一种重要的灾害性害虫,在陕西、山西、河北、河南等枣树主产区普遍发生。本研究旨在揭示我国枣食芽象甲不同种群间的遗传分化和基因交流规律。【方法】利用枣食芽象甲转录组测序的SSR序列,使用荧光标记PCR及毛细管电泳分型方法,筛选出8个微卫星位点,对我国5个省份(山西、陕西、宁夏、河北和河南)10个地理种群共308头枣食芽象甲样本进行种群遗传多样性分析。【结果】8个SSR位点均存在无效等位基因且偏离哈迪 温伯格平衡。各位点的有效等位基因数(Ne)为2.113~8.016,多态信息含量(PIC)为0.561~0.908,期望杂合度(He)为0.476~0.865;种群间遗传分化系数(Fst)平均值为0.151;基因流(Nm)平均值为1.594。枣食芽象甲种群间遗传分化系数与地理距离之间显著正相关(r=0.596, P=0.0035),基于Nei’s遗传距离和Cavalli-Sforza & Edwards余弦遗传距离的系统进化树将10个地理种群均聚为3个相同的分支。【结论】结果说明,枣食芽象甲种群遗传多样性较高,不同地理种群间存在高度的遗传分化,且有一定的基因交流;地理隔离是影响枣食芽象甲地理种群遗传分化和基因交流的重要因素。     

秦岭地区羊肚菌根系土样黏细菌的分离

通过分离陕西秦岭地区羊肚菌根系土样中的黏细菌,建立黏细菌的分离方法,分析羊肚菌根系土样中黏细菌的多样性。采集自陕西商洛地区种植羊肚菌根系土样,采用不同诱导方法分离土样中的黏细菌,比较不同方法的出菌率,通过菌落形态、显微照片对黏细菌进行观察,并结合16S rRNA序列,分析得到的黏细菌种类。采用活的大肠埃希菌作为诱导底物分离出的黏细菌数量最多,本次实验从羊肚菌根系土样中共分离纯化出17株黏细菌,包括5个属,其中黏球菌属(Myxococcus)12株,珊瑚球菌属(Corallococcus)2株,孢囊杆菌属(Cystobacter)1株,原囊菌属(Archangium)1株,标桩菌属(Stigmatella)1株。结果显示羊肚菌根系土壤有黏细菌存在,其中以黏球菌属居多,为后续探讨黏细菌与羊肚菌之间是否存在互生关系提供参考。     

右旋糖酐发酵液酶解制备右旋糖酐40中氮的控制

右旋糖酐发酵液经过吸附除杂和陶瓷膜过滤后处理,在右旋糖酐酶的作用下降解制备右旋糖酐40,对氮进行过程控制,达到右旋糖酐40国家标准。首先以蛋白质作为检测目标,对右旋糖酐发酵液进行吸附条件研究,利用最佳吸附条件进行右旋糖酐发酵液的吸附除杂,氮的去除率达到57%以上,氮含量降至0.09%以下;然后通过陶瓷膜过滤将右旋糖酐与果糖等杂糖分离,并进一步去除氮,氮的去除率达到45%以上,氮含量降至0.040%以下;最后利用右旋糖酐酶对右旋糖酐发酵液处理液进行酶解,右旋糖酐酶解液经过乙醇分级沉淀分离制备右旋糖酐40,氮的去除率达到89%以上,氮含量降至0.003%以下,达到≤0.007%的国家标准。右旋糖酐发酵液酶解制备右旋糖酐40工艺过程氮的控制可以使氮去除率达到98%以上,产品氮含量达到国家标准(≤0.007%),分子量分布有所改善,重均分子量35 000以上,10%小分子＞7 000。     

小檗碱通过PTEN/Nrf2途径抑制胰岛βTC6氧化应激及细胞凋亡

摘要 目的：探讨小檗碱（Berberine,BBR）在棕榈酸（palmitic acid,PA）诱导的胰岛β细胞氧化应激及凋亡中的角色及分子机制。方法：BBR和PA单独或联合处理敲低PTEN的βTC6细胞,利用MTT、Caspase-3活性检测、流式细胞术、ROS含量检测、硝基酪氨酸定量等测定各实验分组的细胞凋亡程度并比较彼此氧化应激水平,利用定量PCR以及Western blotting检测PTEN、AMPK、Nrf2的表达变化。此外,我们还评估了BBR是否可以缓解糖尿病小鼠全身炎症状态和胰岛细胞凋亡,并再次验证了BBR对糖尿病小鼠的治疗效果。结果：BBR通过降低PTEN同时升高Nrf2的表达,进而减轻PA诱导胰岛βTC6细胞ROS以及硝基酪氨酸积累,降低PA诱导性Caspase-3升高。干扰PTEN表达可以与BBR发生协同效应,即协同降低氧化应激性凋亡。经动物实验发现BBR可明显降低糖尿病小鼠血糖以及血清IL-6水平,同时在转录水平降低小鼠胰腺PTEN并上调Nrf2,TUNEL实验发现BBR可以明显抑制糖尿病小鼠胰岛细胞凋亡,而二甲双胍（Metformin, Met）未发现抑制效应。结论：BBR通过下调PTEN并上调Nrf2的表达来发挥对PA引起的βTC6细胞氧化应激以及凋亡的保护作用,而沉默PTEN可反过来与BBR形成协同保护作用。BBR与MET治疗2型糖尿病的降糖效果没有差异性,但BBR可以额外地通过PTEN/Nrf2途径发挥抗炎及抗氧化应激作用。